食品理化检验方法主要内容和使用要点解读（下）

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      食品理化检验方法主要内容和使用要点解读（中）

　　仪器参考条件：方法中会给出仪器参考条件，如色谱仪、色谱柱、流动相、程序升温条件、检测器、质谱参数等。一般食品添加剂检测使用液相色谱或气相色谱，而部分兽药残留或农药残留采用色谱质谱联用。在给定参考仪器条件情况下，需要注意的是可能某些样品基质有干扰。检测色谱项目时，可使用DAD光谱监控、改变流动相梯度或程序升温。日常检验经验显示，三氯蔗糖、TBHQ、山梨酸、阿斯巴甜、糖精钠等项目可能会存在干扰，需要借助更换色谱柱、改变流动相或使用质谱进一步确认。如GB 5009.28-2016食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定第一法中，5.3仪器参考条件中注：当存在干扰峰或需要辅助定性时，可以采用加入甲酸的流动相来测定，实际检测中发现该系统可以提高分离来验证干扰。而色谱质谱联用时，可在方法验证开发质谱条件时，设定多对定性离子来辅助确证。

　　标准曲线制作：有外标法、内标法、基质匹配、基质加标随行、标准加入法等方式，标准曲线范围往往结合目标化合物的仪器响应、方法检出限、定量限、标准限量值、常见关注浓度综合确定。标准曲线配制要注意容器的洁净、体积的精准加入、试剂的顺序加入和温度时间的控制（显色）等，并尽可能保证标准系列和待测物质相同的基体和介质。另外，标准曲线仪器分析时，从低到高浓度进样，并且进样序列中要穿插适当浓度的标准溶液进行仪器响应监控。要特别注意的是，标准曲线产生的不确定度是一个重要的分量。

　　试样溶液的测定：测定中往往分为定性测定和定量测定。

　　定性测定依据保留时间、定性离子的相对丰度比等进行分析。定性确证较为重要，尤其针对复杂基质存在的干扰。识别干扰依赖于对分析系统的稳定性、基质效应的评估，也可借助其他手段（如DAD光谱图、质谱等）来辅助识别。采用定性离子相对丰度比时，要尽可能采用基质匹配、浓度相当的标准溶液建立参考。

　　定量测定需要注意的是进样中要监控全试剂空白，避免交叉污染。样品溶液的待测物的响应值应在仪器测定的线性范围内，适当情况下可将样品溶液进行稀释。

　　结果计算和表达

　　结果计算和表达会明确计算公式、结果单位和保留有效位数，其中数据修约可参考GB/T 8170-2008（数值修约规则与极限数值的表示和判定）。总则4.3.1中明确，在判定测定值或其计算值是否符合标准要求时，应将测试所得的测定结果或其计算值与标准规定的极限数值作比较，而食品检测一般会使用全数值比较法，在日常进行结果判定时要尤其注意。另外，如分析结果未检出，可用未检出表述分析结果，同时应注明定量限或检出限。

　　指在规定条件下，对同一或类似被测对象重复测量所得示值或测得的量值间的一致程度。方法中一般会明确为，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值超过均值的百分比要求。有些方法会因为浓度水平不同而设置不同的要求。精密度达不到方法规定要求往往是因为表征分析系统存在异常，需要系统排查原因。样品制备不均匀，溶剂提取、水解酶解、淋洗洗脱、溶剂复溶等条件不充分，人员、容器、分析系统被污染都有可能影响精密度。

　　其他规定了方法的检出限和定量限，这也是方法验证时需要满足的重要参数条件。检出限或定量限水平的满足对于不得使用、禁用等指标的判定尤其重要；如达不到要求，需要进一步优化仪器条件，或考察试剂纯度等。

　　另外，方法中可能还会给出不同浓度的准确度考察要求，以及参考色谱图等，方法使用时都需要作为参考验证使用。

　　参照GB/T 27417，方法验证是指实验室通过核查，提供客观有效证据证明满足检测方法规定的要求。即证实该方法能在该实验室现有的设施设备、人员、环境等条件下获得令人满意的结果，必要时可参加能力验证或进行实验室间比对。方法验证过程中关键的参数取决于方法的特性和可能测到的样品基质的范围，至少应测定正确度和精密度。对于痕量分析，实验室还应确保检出限、定量限验证。当然，还可验证线性范围、基质效应等，方法回收率偏差范围可参考GB/T 27404要求。

　　方法验证只能证实实验室要素满足方法的要求和实验室拥有相应的技术能力，但不能充分表征批量实验结果的准确性和分析系统是否正常。批量实验时，为监控可能由于环境、试剂、接触品、人员、实验操作、分析系统等关键要素对结果的异常影响，需要加强检验过程质量控制，做到有效科学评估实验结果。一般会采取全试剂空白、有证标准物质、平行样、关键点加标回收（定量限、限量水平或其他关注浓度）、在线分析监控、不同原理方法比对、人员比对、不同来源标准品比较等多种方式进行监控。日常需积累空白响应、关键点仪器响应、基质效应、平行样精密度、回收率水平、标准物质测定值等重要信息，尽可能同一实验室稳定，也可采用质量控制图来分析预警。

　　归纳总结

　　使用理化检验方法时，要系统化理解方法所有要求，包括方法的各部分技术要求和方法操作关键点等；平时要积累方法的性能参数，便于识别实验异常的重要信号；批量痕量分析时，要采取针对性手段加强过程质量控制，确保结果的准确性和有效性。

　　□余晓琴 四川省食品药品检验检测院